CRISPR是一个不断突破现有认知的技术工具，不仅可以实现基因敲除/突变/敲入，现在它还可以做基因过表达/基因沉默/基因调控等，接下来就听Cas9X™为您仔细介绍一下这位“斜杆青年”。
在生物学研究中，CRISPR-gRNA文库是一种高通量筛选靶基因的工具，可大规模或全基因组进行功能筛选，涉及信号通路、疾病、细胞药物应答、发育、基因调控等方面，高分的研究成果层出不穷。海星生物在gRNA文库筛选方面积累了丰富的经验，能够帮助客户快速应用最新的技术构建CRISPR KO（基因敲除）、CRISPRa（基因激活）文库、CRISPRi（基因抑制/沉默），并提供全套的细胞功能筛选服务，涵括文库构建、病毒文库、细胞转染和筛选、NGS测序与数据分析服务。下面就和我们一起仔细了解这些新的应用技术吧！
CRISPR-gRNA文库构建技术流程
CRISPRa（基因激活）系统是用于激活内源性基因转录的强大工具，切割失活的Cas9（dCas9）连上转录激活子（如VP64、p65和HSF1），可以有效促进基因组特定位点的转录。研究显示，CRISPRa技术可以使得基因的转录得到了两倍到数千倍的增长，许多基因的活性甚至有了几个数量级的增加。
服务的内容：客户提供相关的需要激活表达的基因信息，海星生物将按照基因的生物信息特点，设计gRNA、构建载体、包装病毒通过病毒转染到目的细胞，筛选出激高表达或者合适的gRNA序列，并构建成CRISPRa稳转细胞株，并使用Q-PCR对目的基因表达量进行检测，并依据客户的需求提供单克隆建立和表型的筛选服务。
服务优势：通过内源基因组背景进行激活，激活表达量可以从2倍到几个数量级的提升。
CRISPRa vs ORF过表达
RISPRi （基因抑制/沉默）系统是用于抑制内源性基因转录的强大工具，当dCas9（没有切割活性的Cas9）被引导到靶基因的转录起始位点TSS（transcription start site）时，dCas9能够物理性阻碍RNA聚合酶的通过，导致基因沉默。同时dCas9融合了一个基因抑制结构域，如KRAB结构域，这样的蛋白称之为dCas9-KRAB，可以进一步提高转录抑制的效率。此外，dCas9也可以融合双抑制结构域KRAB-MeCP2，抑制效果更佳。
由于dCas9-KRAB CRISPRi系统是在DNA水平抑制基因表达，因此适用于多种类型的基因，包括：mRNA、非编码RNA、microRNA、反义转录本、核定位RNA以及聚合酶III 转录本等基因的转录抑制。
CRISPRi显著的转录抑制效果
服务内容：
客户只需要提供要进行敲减的基因和转录本信息，将有海星生物设计gRNA序列，构建病毒载体，病毒包装后转染目的细胞，并根据客户的需求进行筛选出符合敲减水平低gRNA，并提供CRISPRi稳转细胞株的构建和单克隆的扩增筛选的服务。
技术优势：
不改变内源基因组背景、基因抑制效果可筛选、适用更多基因种类。
RNAi vs CRISPRi
研究基因功能最常见的方法是，减少或者阻断基因表达，然后进行表型分析。RNAi和CRISPRi都是常用的基因表达水平敲低的研究工具。
RNA干扰（RNAi）靶向细胞质中成熟的RNA，而CRISPRi则在细胞核内阻止转录的起始，因而敲低效果更为显著。此外RNAi的脱靶效应要远远高于CRISPRi。
CRISPRi的敲低效果显著优于RNA
