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siRNA指一类长约21-23nt(从文献报道看,19-25nt都是可以的)的双链RNA分子,一般3’端有两个游离的碱基,通过RNA干扰途径沉默目标基因。
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siRNA介导的RNA干扰机制是什么?
RNAi首先将较长的双链 RNA 加工和切割成 siRNA(可以直接体外合成siRNA),通常在每条链的 3'末端带有 2 个核苷酸突出端,负责这种加工的酶是一种RNase III酶,称为Dicer。siRNA与一种称为RNA诱导的沉默复合物(RNAinduced silencing complex, RISC)的多蛋白组分复合物结合。在RISC复合物中,siRNA链被分离,具有更稳定的5′末端的链通常被整合到活性RISC复合物中。然后,反义单链siRNA组分引导并排列在靶mRNA上,并通过催化RISC蛋白(Argonaute family(Ago2)),使mRNA被切割。
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siRNA 3′端突出的dTdT有什么作用?
一般情况下,3′端的2 个碱基使用突出的dTdT(deoxythymidine dinucleotide)取代,能够增强siRNA 双链复合体的稳定性,进而增加siRNA的敲低效率,一般情况下,序列合成公司会自动增加dTdT结构。
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siRNA转染的时候需要用什么转染试剂?
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siRNA什么价格? 货期多久? 交付什么?
海星siRNA三保一活动是980元,货期1-2周;交付:3条目的基因siRNA(每条2 OD),阴性对照siRNA(1 OD),FAM标记阴性对照siRNA(1 OD),阳性对照siRNA(1 OD)
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小干扰交付是什么呢,作用时间多久?
siRNA小干扰交付的是化学合成的RNA,以干粉形式交付;siRNA是瞬时干扰,不整合到目的细胞的基因组上,本质是RNA,比较容易降解,建议转染后24-48h 检查基因水平的变化,48-72h 检测蛋白水平的变化。(不同的基因半衰期不同,siRNA干扰是抛物线形的,可以多设计几个时间点检测干扰效果)
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干扰的效率一般是多少?
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收到货怎么保存呢,有效期是多久?
产品以冻干粉的形式常温运输。收到产品后,请于-20℃~-80℃保存,冻干粉可以稳定保存一年。如果已经加水溶解的话,请尽快使用。
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海星980套装赠送对照的作用是什么?
套装中共有三个对照:一个带FAM 的阴性对照、一个是普通的阴性对照、一个是阳性对照;FAM-NC是为了观察转染效率,以便调整实验参数;NC是为了说明靶点的特异性,一般操作熟练的话只需要做NC对照即可。阳性对照是验证实验的有效性,可用来确认实验方法及试剂是否出现问题(这个一般都不需要做)。
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