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小干扰siRNA常见问答


1

 
siRNA 小干扰是什么?


siRNA指一类长约21-23nt(从文献报道看,19-25nt都是可以的)的双链RNA分子,一般3’端有两个游离的碱基,通过RNA干扰途径沉默目标基因。


2

 

siRNA介导的RNA干扰机制是什么?




RNAi首先将较长的双链 RNA 加工和切割成 siRNA(可以直接体外合成siRNA),通常在每条链的 3'末端带有 2 个核苷酸突出端,负责这种加工的酶是一种RNase III酶,称为Dicer。siRNA与一种称为RNA诱导的沉默复合物(RNAinduced silencing complex, RISC)的多蛋白组分复合物结合。在RISC复合物中,siRNA链被分离,具有更稳定的5′末端的链通常被整合到活性RISC复合物中。然后,反义单链siRNA组分引导并排列在靶mRNA上,并通过催化RISC蛋白(Argonaute family(Ago2)),使mRNA被切割。

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3

 

siRNA 3′端突出的dTdT有什么作用?



一般情况下,3′端的2 个碱基使用突出的dTdT(deoxythymidine dinucleotide)取代,能够增强siRNA 双链复合体的稳定性,进而增加siRNA的敲低效率,一般情况下,序列合成公司会自动增加dTdT结构。


4

 

siRNA转染的时候需要用什么转染试剂?


转染试剂使用脂质体即可,可以使用lipo2000或lipo3000。

5

 

siRNA什么价格? 货期多久? 交付什么?


海星siRNA三保一活动是980元,货期1-2周;交付:3条目的基因siRNA(每条2 OD),阴性对照siRNA(1 OD),FAM标记阴性对照siRNA(1 OD),阳性对照siRNA(1 OD)

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6

 

siRNA三保一是什么?如果三条siRNA效果都不好怎么办,有售后吗?

三保一:承诺转染效率≥90%的情况下,保证至少1条序列mRNA水平干扰效率≥70%。如果三条都达不到干扰效果的话,我们会帮客户再免费设计并合成三条siRNA。

7

 

小干扰交付是什么呢,作用时间多久?



siRNA小干扰交付的是化学合成的RNA,以干粉形式交付;siRNA是瞬时干扰,不整合到目的细胞的基因组上,本质是RNA,比较容易降解,建议转染后24-48h 检查基因水平的变化,48-72h 检测蛋白水平的变化。(不同的基因半衰期不同,siRNA干扰是抛物线形的,可以多设计几个时间点检测干扰效果)


8

 

干扰的效率一般是多少?


干扰效率一般是50-70%,这个是由技术本身决定的,干扰只是在RNA水平上对基因实现敲降,会有部分RNA仍然表达,目前我们的是保证至少一条的干扰效率是70%。

9

 

收到货怎么保存呢,有效期是多久?



产品以冻干粉的形式常温运输。收到产品后,请于-20℃~-80℃保存,冻干粉可以稳定保存一年。如果已经加水溶解的话,请尽快使用。


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海星980套装赠送对照的作用是什么?



套装中共有三个对照:一个带FAM 的阴性对照、一个是普通的阴性对照、一个是阳性对照;FAM-NC是为了观察转染效率,以便调整实验参数;NC是为了说明靶点的特异性,一般操作熟练的话只需要做NC对照即可。阳性对照是验证实验的有效性,可用来确认实验方法及试剂是否出现问题(这个一般都不需要做)。


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