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siRNA产品使用说明

| siRNA产品说明书下载

MQ009A1 siRNA产品使用说明书.pdf


| siRNA产品介绍

常规化学合成siRNA为21~23nt的双链小分子RNA,产品为冻干粉形式的即用型试剂。


运输保存

产品以冻干粉的形式常温运输。收到产品后,请于-20°C~-80°C保存,冻干粉可以稳定保存一年。荧光标记的RNA,如FAM等标记的Oligo因为对光敏感,必须避光保存。


| 使用须知

(1) siRNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开管子前先高速离心,然后再慢慢打开管盖,溶解时请加足量 DEPC H2O后盖上管盖,震荡溶解。
(2) 为避免外因素(包酶,极pH或者温度件等)导产品降解所有操作严格遵RNA操作规则。实验过程中,产品最好于冰上放置,使用完毕后请于-20°C~-80°C小心保
(3) 使用前瞬时离心,用DEPC H2O配制成20 μM储存液,分装保存,避免反复冻融(建议不超过5次)。
表1, 20 μM储存液的配置方法

siRNA(nmol)

2.5

5

10

50

溶解体积 (μL)

125

250

500

25

注: 1OD=2.5nmol=40 μg


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| 基因沉默效果不好,该如何改善?

1. 提高转染效率

成功的转染是RNAi实验的前提。若基因沉默效果不佳,则需先排查转染效率方面的问题,可通过检测转染效率或者采用阳性对照siRNA验证RNAi实验体系。首先可依据转染试剂说明书进行转染条件(细胞密度,转染试剂用量,转染时间等)优化尝试,其次可尝试在其他细胞类型上进行转染。若由于实验模型限制无法使用其他细胞,可考虑更换转染试剂或转染方法(如电转)。


2. 检测目的基因表达水平

若目的基因在实验细胞中的表达丰度很低,是难以得到有效的沉默的。一般目的基因与GAPDH或ACTB的ΔCt值为10以内,比较适合做RNAi,若ΔCt值达到15以上则无法得到有效的沉默效果。对于目的基因表达丰度低的情况,建议更换实验细胞。


3. 优化siRNA浓度

siRNA在一定的丰度下才能达到理想的作用效果,故可根据推荐浓度(50nmol)进行预实验测试,再结合实验细胞系类型及目的基因的表达水平设置siRNA浓度梯度来优化siRNA最适浓度。


4. 检测分析方法有误

引物使用有误,检测时间点设置不合理,对照样本异常,实验样本检测数据不稳定等因素都会对后期实验数据分析造成影响,此类问题需根据具体的问题有针对性地进行分析调整。


5. 更换其他siRNA
若确定转染效果尚佳,其他因素也分析没有问题的情况下,却没有达到理想的基因沉默效果,则可以尝试更换其他siRNA来测试。由于RNA本身序列特性,或者靶位点的二级结构复杂等因素,有些siRNA的基因沉默效果可能没有那么显著,这种情况下可以尝试更换siRNA。


6. 其它原因

如目的基因的表达调控特性导致其难以沉默,并已排除转染方法,转染效率,基因表达水平及siRNA浓度等方面的问题,并尝试过5对以上siRNA,则应考虑更换细胞进行尝试。如无法更换细胞和感兴趣的基因,可以考虑更换为基因敲除的方式进行。

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