技术平台

人前列腺癌细胞(Lncap)培养注意要点

LNCaP克隆FGC是由JS Horoszewicz等人于1977年从一名50岁的白人男性(血型B +)的左锁骨上淋巴结的穿刺活检中分离出来的,该确诊为转移性前列腺癌。

该细胞不形成均一的单层而是成簇生长,所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞;该细胞贴壁不牢,达不到汇合状态,而且会使培养基迅速变酸;传代后48h内不要扰动,一定要保持培养瓶静止。如果此时挪动培养瓶,会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况,需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁,细胞贴壁后可更换培养基。

image.png


细胞名称:人前列腺癌细胞(STR鉴定正确)
细胞简称Lncap
产品货号TCH-C238
种属来源
组织来源前列腺
疾病特征前列腺癌
细胞形态上皮细胞样
生长特性贴壁生长
培养体系RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
配套培养基货号:TCH-G238
传代比例:1:2-1:3,每2-3天换液一次
传代周期72-96 h
培养条件气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃
冻存条件60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存
质量检测细菌、真菌、支原体检测均为阴性

Lncap细胞培养注意事项

1. 该细胞并不形成一致的单层,而是形成集落

2. 该细胞会使培养基快速变酸,且生长缓慢,故传代后 48 小时内不应扰动

3. 传代后细胞贴壁较慢,48h 内不要扰动

4. 细胞贴壁性不强,普通 TC 处理的培养瓶或皿不能使细胞很好的贴壁,培养难度较高。 建议使用 Corning 的 cellbind 细胞培养瓶,或者使用多聚-L-赖氨酸溶液对培养底面包被后进行细胞培养

5. 常温运输途中,多数细胞会从培养瓶底分离,悬浮在培养基中,请收集悬浮细胞离心 后重新接种。

6. 收货后,如果发现细胞漂浮或成团,可按下面的步骤进行处理:

(1)将培养瓶内的所有培养基,转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm 3min);
(2)去掉上清,用PBS重悬细胞,将细胞收集到一个离心管中,PBS震动离心管混匀即可,再次离心(1200rpm 3min);
(3)去掉上清,加入1ml左右0.25%胰酶,重悬混匀细胞。震动离心管,混匀即可,不能吹打。放入培养箱,消化细胞,消化时间3分钟左右;

(4)消化完毕后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散。加入5ml含血清的培养基,混匀后终止消化,离心(1200rpm 3min);

(5)去掉上清,加入5-7ml相应完全培养基混匀,轻轻/反复吹打细胞,接种于无菌T25瓶中(接种容器应提前用对应培养基浸润)。

友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab 海星生物商城
版权所有:海星生物科技有限公司 Copyright © 2020 Haixing Biosciences. All rights reserved. 备案号: 苏ICP备2022006589号-1
新闻资讯 站点地图