如何快速的构建自己的基因敲除细胞系?
随着文章研究的水平的增加,现在很多RNA干扰的技术无法解决的问题在细胞研究中特别突出,老师们经常被问及的问题有很多:
1、RNA干扰去除70%已经非常好了,但是剩下的30%是否足够有生物功能?怎样对照?
2、代谢组学里面代谢酶蛋白的活性很高,怎样做干扰都无法去除背景的代谢产物?怎么办?
3、基因干扰用药物压制,蛋白看到了明显的下调但是多次传代后蛋白表达又回来了?怎么办?
随着这些问题被问及,很多老师也在考虑有没有更好的细胞模型用于支持实验的研究?
答案就是:DNA片段敲除!
由于使用的是片段敲除的策略,DNA出现了大片段(几Kb)缺失,导致其mRNA转录也彻底消失,所以蛋白就不会有任何背景了。
而实现这个技术的方式就是Cas9技术!
Cas9X™平台通过专有的MixClone™技术服务:通过了高效的电转技术,可以将电转的效率提高到80%以上,再经过药物筛选的方式可以达到高效的基因敲除细胞的富集,形成一个高度基因敲除的Cell Pool,敲除细胞比例达到10--50%(依据不同的细胞系差异很大),而这个技术服务的投入非常大的价值在于给科学家一个更加便捷的选择:
1、快速的构建流程:gRNA载体构建到交付仅需5周(使用Cas9X™的细胞库)
2、低成本服务:整个服务的过程仅需9980元(使用Cas9X™认可的细胞株)
3、高效率,可以对目的基因进行初步的筛选,也可以对目的细胞进行克隆化,获得纯合敲除的单克隆;
4、更安全:整个服务都承诺无效退款(而且会有全套的细胞检测:支原体检测和无菌检测,基因检测)
由于MixClone™技术服务的稳定高效和低成本优势:
目前已经成为很多代谢研究和基因研究实验室基因研究的合作技术,成为上海和北京多个中科院机构的合作伙伴。