| 慢病毒包装服务：
作为基因敲除的服务供应商，我们可以为您提供研究所需敲除质粒载体构建和慢病毒包装服务。我们的慢病毒载体来源于HIV-1病毒，序列经过精心优化，提高了生物安全性、基因表达水平和病毒转导效率。慢病毒可将特定基因片段随机、稳定地整合到宿主细胞的基因组中，实现目的基因的持续稳定的表达目的产物，因此，目前慢病毒载体已经广泛地应用于基因的表达调控如过表达，干扰和基因敲除。
腺病毒载体（Adenovirus）能够携带大片段外源DNA、感染分裂细胞和非分裂细胞、诱导体液和细胞免疫应答（这对于疫苗开发是有益的）、表现出高效率的转导和高水平的转基因表达、不整合细胞DNA（在细胞内保持dsDNA游离体）。
我们提供第一代腺病毒（E1/E3-deleted Ad5）和嵌合型腺病毒（Chimeric adenovirus）包装服务。Ad5病毒的感染是通过病毒颗粒表面的纤突（Fiber）与细胞表面受体CAR（Coxsackie virus and adenovirus receptor）特异性结合而介导的。 并不是所有细胞都高表达CAR，Ad5病毒在某些不表达或者低表达CAR的细胞种类上的应用受限。我们开发了嵌合型腺病毒，它的感染是通过嵌合型纤突（Chimeric fiber）与细胞表面分子CD46特异性结合而介导的。
| 腺相关病毒（AAV）包装服务：
腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。腺相关病毒主要以游离于染色体的附加形式存在，并可长期存在于非分裂期的细胞中。由于具有高组织特异性、低免疫原性、良好的扩散性、高安全性以及宿主范围广等特点，AAV特别适用于体内的研究，且已成为基因治疗领域中最具前景的病毒载体之一。我们开发出一系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺相关病毒包装工艺水平。
常规病毒包装 | ||
病毒类型 | 规格 | 规格 |
慢病毒包装 | 中规格 | 定制病毒＞10^8 TU/ml, 10 x 100 ul |
对照病毒＞10^8 TU/ml, 2 x 100 ul （赠送） | ||
大规格 | 定制病毒＞10^9 TU/ml, 10 x 100 ul | |
对照病毒＞10^8 TU/ml, 2 x 100 ul （赠送） | ||
腺病毒包装 | 中规格 | 定制病毒>10^10 PFU/ml，10 x 100 ul |
对照病毒>10^10 PFU/ml，2 x 100 ul（赠送） | ||
大规格 | 定制病毒>10^11 PFU/ml，10 x 100 ul | |
对照病毒>10^10 PFU/ml，2 x 100 ul（赠送） | ||
腺相关病毒包装 | 中规格 | 定制病毒>10^11 GC/ml，10 x 100 ul |
对照病毒>10^11 GC/ml，2 x 100 ul（赠送） | ||
大规格 | 定制病毒>10^12 GC/ml，10 x 100 ul | |
对照病毒>10^11 GC/ml，2 x 100 ul（赠送） | ||
中规格和超纯化 | 定制病毒>10^13 GC/ml，10 x 50 ul | |
对照病毒>10^13 GC/ml，10 x 50ul（选购） | ||
大规格和超纯化 | 定制病毒>10^13 GC/ml，10 x 100 ul | |
对照病毒>10^13 GC/ml，10 x 100 ul（选购） | ||
备 注 | 载体构建费用另算。 慢病毒和腺相关病毒包装周期2-3周；超纯化增加1周；载体构建周期2-3周（ORF在2 Kb以内） ORF大于2 Kb的，载体构建部分的费用和周期适当调整 | |
shRNA 3+1套装 | ||
套装类型 | 产品规格 | 产品规格 |
shRNA慢病毒3+1套装 | 中规格 | 定制病毒＞10^8 TU/ml, 10 x 100 ul |
对照病毒＞10^8 TU/ml, 10 x 100 ul （赠送） | ||
中规格和超纯化 | 定制病毒＞10^9 TU/ml, 10 x 50 ul | |
对照病毒＞10^9 TU/ml, 10 x 50 ul （赠送） | ||
shRNA腺病毒3+1套装 | 中规格 | 定制病毒>10^10 PFU/ml，10 x 100 ul |
对照病毒>10^10 PFU/ml，10 x 100 ul（赠送） | ||
大规格和超纯化 | 定制病毒>10^12 VP/ml，10 x 100 ul | |
对照病毒>10^12 VP/ml，10 x 100 ul（赠送） | ||
shRNA腺相关病毒3+1套装 | 中规格 | 定制病毒>10^11 GC/ml，10 x 100 ul |
对照病毒>10^11 GC/ml，10 x 100 ul（赠送） | ||
中规格和超纯化 | 定制病毒>10^13 GC/ml，10 x 50 ul | |
对照病毒>10^13 GC/ml，10 x 50ul（赠送） | ||
大规格和超纯化 | 定制病毒>10^13 GC/ml，10 x 100 ul | |
对照病毒>10^13 GC/ml，10 x 100 ul（赠送） | ||
备 注 | 含3个定制shRNA病毒，1个scramble shRNA对照病毒（上述费用已包含载体构建费用） 慢病毒/腺相关病毒套装周期4-5周；腺病毒套装周期6-8周 | |
病毒表达系统 | 慢病毒系统 | 腺病毒系统 | 腺相关系统 |
外源基因在细胞 的存在方式 | 随机整合 | 非整合 | 定向低频整合 或非整合 |
组织嗜性 | 广泛 | hAd5只感染表达CAR受体的细胞 | 取决于血清型 |
表达持续时间 | > 2 months | ~ 1 month | > 6 months |
表达丰度 | 中水平 | 高水平 | 高水平 |
可插入片段大小 | 高达8kb | 不超过6kb | 最高可达4.7kb |
体内免疫反应 | 低 | 高 | 非常低 |
优点 | 应用范围广 转导效率高 稳定遗传 | 转导效率高 可携带大片段基因 病毒可扩增 | 免疫原性小 宿主范围广 能长期表达外源基因 |
Q: 什么是MOI？
A: 在微生物学中， MOI是病原体(如噬菌体或病毒、细菌等)与感染目标(如细胞)的比率。对于病毒， MOI是病毒颗粒数量与特定空间中存在的目标细胞数量的比率。通常可将某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。
Q：如何稀释病毒？
A：您可使用完全培养基、PBS液等将病毒稀释到需要的滴度。如将滴度为5 x 109 TU/ml的病毒稀释到1 x109TU/ml，则需取20 µl病毒液加入到80 µl的完全培养基中。
Q：用于病毒感染的细胞接种量是多少？
A: 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后3天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。针对大部分细胞系： 传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右，则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右；针对某些原代细胞： 由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到50%～ 60%，但要确保在感染后3天时细胞汇合度达到90%～ 100%；针对非分裂细胞： 如神经元细胞，接种后不再增殖，此时可以按照80%的汇合度进行接种。
Q：如何提高病毒对细胞的感染效率？
A：病毒对细胞的感染效率受细胞自身生长的状态，细胞数量，细胞被病毒感染的难易程度等多个因素影响。因此保证细胞生长状态良好，轮廓清晰，合适的细胞密度，选择最优的感染条件（如合适的MOI值）可以更好的保证感染效率。对于悬浮细胞，可采用离心感染方法，减少病毒感染时的体积，从而提高感染效率。如可以在加入病毒后将细胞培养板密封，用离心机在1000g条件下离心1h，再放回培养箱中正常培养。
Q：加入病毒病毒后，细胞死亡很厉害，该如何处理？
A：病毒有一定的细胞毒性，如果培养过程中细胞出现了明显的病变或细胞状态变差，建议将转导时间缩短至5~8小时之间。或者调整并降低感染的MOI值，并且在感染后4小时、 8 小时、 12小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差时，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液
Q：细胞能被病毒感染，但为何GFP荧光很弱？
A：GFP病毒感染细胞后，细胞中荧光强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类等因素。在增殖较慢的细胞中感染病毒后， GFP蛋白表达达到峰值需要较长的时间。
Q：腺病毒载体在体外实验中应注意哪些问题？
A：由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同，可以通过预实验来判断目的细胞中的腺病毒用量。病毒感染细胞的最佳时期是细胞处于对数生长期时，因此，在细胞消化后12～24小时加入病毒。病毒感染时细胞培养液的体积尽量小一些，以完全覆盖细胞为准。一般感染腺病毒24 小时后就能检测到目的基因的表达，48 小时表达达到较高水平。
Q：如何确定我所用的目的细胞是否可以被腺病毒感染？
A：腺病毒有广泛的宿主范围,它可以感染人类或者其他哺乳动物细胞系或原代细胞，包括可分裂的和不可分裂的细胞。只有少数细胞系不被感染，例如一些淋巴细胞系对腺病毒有更强的抵抗性。为了确认所使用的目的细胞是否能够被腺病毒感染，需要通过带有标记（如GFP）的腺病毒对目的细胞进行预实验。
客户成果
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案例分析
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参考文献
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