|  支原体污染的危害

支原体是实验室中常见的污染细胞的原核生物，据统计约有15%-35%的细胞被支原体污染。支原体会改变宿主细胞的结构和功能等一系列特征，造成实验结果不正确；干扰细胞代谢和生长，改变核酸合成，影响细胞抗原性，导致染色体改变，干扰病毒复制以及模仿病毒的作用。因此，每一株外来细胞在进入实验室之前，都应进行支原体检测，并且应对培养中的细胞定期（如每2-3个月）进行支原体检测。

建立定期的监控方案，有助于提高科研效率，在污染发生在早期时及时处理。可避免支原体污染造成更大的损失！

体外培养环境中，细胞自身没有抗污染的能力，即使培养基会添加抗生素，抵抗污染的能力也很有限。常见的微生物污染为细菌、真菌、支原体和病毒等，其中又以支原体污染最为普遍棘手。一旦污染了支原体的细胞将无法正常形成单克隆，而且细胞转染过程容易死亡，细胞实验效率极低。为了维持实验的稳定，必须对所有的实验使用到的细胞进行支原体的检测。

支原体污染后，细胞不会有明显的死亡现象，且支原体通常能与细胞长期共存，培养体系亦无浑浊现象，然而实际上却可能存在细胞形变，DNA合成受抑制等诸多问题，并且即使发现支原体污染也较难彻底清除，因此确保细胞在实验初期无微生物污染是至关重要的。
采用PCR法对目的细胞进行细菌、真菌和支原体等检测。以微生物16（18）SrRNA基因为靶基因，设计通用引物并建立PCR扩增体系。

如常用的两个针对16S rRNA基因的通用引物对为27F, 1492R和63F, 1387R。
27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；1492R：5'-TACCTTGTTACGACTT-3'
63F：5’-CAGGCCTAACACATGCAAGTC-3’；1387R：5’-GGGCGGTGTACAAGGC-3’

图1  细胞样品为PCR阳性，将PCR产物送测序，经BLAST比对为牛支原体

研究调查表明，约有20多种支原体能污染细胞（尤其是传代细胞），95%以上是牛源性，常见为口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.Hyorhinis）和菜氏无胆甾原体（A.laidlawii）。

通用的快速基因诊断技术，经大量实验证实，能保证所选引物具有良好的保守性和特异性，重复性好且操作简单，相较于传统的微生物培养法，能有效地缩短实验周期至3天，达到快速反馈检测结果的目的。

|  成功案例